(平行线法)
本法系依据A型肉毒毒素的肌肉麻痹效应对小鼠的致死作用，将供试品与参考品分别做系列稀释后注入小鼠体内，通过计算半数致死量(LD50)，并根据质反应平行线法对供试品的LD50测定值进行校正，从而推算出每瓶供试品中所含A型肉毒毒素的小鼠LD50总量(1LD50即为1个A型肉毒毒素效价单位)。
试剂稀释液 0.85%~0.90%氯化钠溶液。
供试品和参考品溶液的制备 取供试品和参考品各10~20瓶，分别用2.5ml0.85%~0.90%氯化钠溶液复溶后，混合均匀，以此为母液，将供试品与参考品分别按相同的等比间隔稀释至不少于5个稀释度，使中间稀释度样品在注射后约能使半数动物死亡。
测定法 用稀释好的供试品和参考品溶液分别注射26~30日龄雌性昆明小鼠(SPF级)，每个稀释度注射10只，每只腹腔注射0.5ml。注射后连续观察4天，毎日记录小鼠死亡结果，根据第4天动物存活率的剂量反应曲线，用平行线法计算结果，95%可信限应在效价的50%~200%。
有下列情况应重试：
同一稀释度的小鼠中至少2只属非特异死亡。
试验成立应具备的条件：
(1) 参考品和供试品的最低稀释度70%以上动物应死亡；
(2) 参考品和供试品的最高稀释度70%以上动物应存活；
(3) 每批供试品或参考品应至少含4个有效稀释度，并且除最低和最高稀释度外，还应至少含一个半数及以上动物死亡和半数及以下动物死亡的稀释度；
(4) 供试品和参考品的剂量反应曲线在平行性及直线性上应无显著性差异。