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IgG含量测定法
产品名称:

IgG含量测定法

上市日期: 2022-11-08

       本法系依据免疫球蛋白G(IgG)与相应的抗体特异性结合后,在适宜的电解质、温度、pH值条件下,产生凝集反应,形成抗原-抗体复合物。根据供试品的吸光度,求出供试品中IgG的含量。

  试剂   (1)缓冲液  称取三羟甲基氨基甲烷(Tris)12.42g、氯化钠9g、聚乙二醇6000 50g、牛血清白蛋白(BSA)1g、叠氮化钠(NaN3)1g,加水溶解,用1.0mol/L盐酸调节pH值至7.4,加水稀释至l000ml。

  (2)抗人IgG血清  按说明书要求将冻干抗人IgG血清复溶,按标示效价取一定量抗人IgG血清,加缓冲液稀释至抗体最终效价为1:4(例如抗人IgG血清效价为1:100,量取原液2ml加抗体缓冲液48ml),充分混匀,0.45μm膜过滤。4℃保存备用。

  IgG标准品溶液的制备       用0.85%~0.90%氯化钠溶液将IgG标准品在每1ml含0.2~6.0mg范围内做适当的系列稀释(通常做5个稀释度)。

  供试品溶液的制备   用0.85%~0.90%氯化钠溶液将供试品稀释成高、中、低3个稀释度,其IgG含量均应在标准曲线范围内。

  测定法     取供试品溶液10μl,加入已预热至37℃并经稀释的适宜浓度的抗人IgG血清1ml,混匀,每个稀释度做2管,置37℃水浴中保温1小时,充分混匀,照紫外-可见分光光度法(通则0401),在波长340nm处分别测定吸光度。

  用IgG标准品溶液10μl替代供试品溶液,同法操作。

  计算标准品和供试品不同稀释度溶液的吸光度的均值。以标准品溶液的IgG含量的对数值对其相应吸光度的对数值作直线回归,求得直线回归方程,相关系数应不低于0.99;然后将供试品溶液吸光度的对数值代入直线回归方程,求得该对数值的反对数,再乘以稀释倍数,求取每lml供试品溶液IgG含量,再由供试品各稀释度IgG含量求平均值,即为供试品IgG含量(g/L)。

  【附注】(1)全部反应管必须在10分钟内测量完毕。

  (2)设置紫外分光光度计狭缝宽度(Slit Width)为2nm。

  (3)每次测定可根据供试品IgG含量,适当调整标准品溶液中IgG含量范围。


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