试剂 （1）2mol/L盐酸羟胺溶液 称取盐酸羟胺13.9g，加水溶解并稀释至100ml，冷处保存。
（2）3.5mol/L氢氧化钠溶液 称取氢氧化钠14.0g，加水使溶解并稀释至100ml。
（3）4mol/L盐酸溶液 量取盐酸33.3ml，加水稀释至100ml的溶液。
（4）0.37mol/L三氯化铁-盐酸溶液 称取三氯化铁(FeCl3·6H2O)10.0g，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至100ml。
（5）碱性羟胺溶液 量取等体积的盐酸羟胺溶液(2mol/L)与氢氧化钠溶液(3.5mol/L)混合。3小时内使用。
对照品溶液的制备 精密称取已干燥至恒重的氯化乙酰胆碱22.7mg(或溴化乙酰胆碱28.3mg)，置50ml量瓶中，加0.001mol/L醋酸钠溶液(pH4.5)溶解并稀释至刻度，摇匀。
供试品溶液的制备 取供试品，用水稀释成O-乙酰基浓度为0.5~2.5mmol/L的溶液。
测定法 精密量取氯化乙酰胆碱(或溴化乙酰胆碱)对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分别置试管中，补加水至1ml，加新鲜配制的碱性羟胺溶液2ml，摇匀，于室温放置4分钟，加4mol/L盐酸1ml，调节pH值至1.2±0.2，摇匀，加0.37mol/L三氯化铁-盐酸溶液lml，摇匀，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在波长540nm处测定吸光度。另精密量取上述相应的系列对照品溶液，自“补加水至1ml”起，除加酸与加碱性羟胺的次序颠倒外，同法操作，用作对照品溶液的空白对照。
精密量取供试品溶液lml置试管中，自本法前述“加新鲜配制的碱性羟胺溶液2ml”起，同法操作；另取供试品溶液1ml，与对照品溶液的空白对照同法操作，用作供试品溶液的空白对照。
将标准管各吸光度分别减去相应空白对照管的吸光度，以标准管中所含对照品溶液的体积对其相应的吸光度作直线回归，将供试品的吸光度减去相应空白对照管的吸光度后代入直线回归方程，计算出每1ml供试品相当于对照品溶液的体积(V，ml)。按下式计算供试品中的O-乙酰基含量：
供试品中O-乙酰基含量(mmol/L)=V×2.5
式中 2.5为对照品溶液中乙酰胆碱的含量(mmol/L)。