本法系依据在碱性条件下，羟胺与碘反应生成亚硝酸，然后与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，再与α-萘胺耦联形成有色的偶氮化合物，采用紫外-可见分光光度法(通则0401)测定羟胺的含量。
试剂 (1) 6%乙酸钠溶液 称取无水乙酸钠6g，加适量水溶解并稀释至100ml混匀即得。
(2)1%对氨基苯磺酸溶液 称取对氨基苯磺酸0.50g，加适量25%乙酸溶液溶解后稀释至50ml，即得。
(3)1.3%碘溶液 称取碘0.65g；溶于冰醋酸，稀释至50ml，即得。于通风橱中配制和使用。
(4)0.4mol/L硫代硫酸钠溶液 称取硫代硫酸钠3.16g，溶于适量水中，稀释至50ml，即得。
(5)0.6% α-萘胺溶液 称取α-荼胺0.3g，溶于30%乙酸，稀释至50ml，即得。于通风橱中配制和使用。
盐酸羟胺对照品溶液的制备 用水将盐酸羟胺对照品定量稀释至每lml含1000nmol，作为贮备液。精密量取贮备液适量，用水定量稀释至每1ml含150nmol、120nmol、90nmol、60nmol和30nmol，作为不同浓度的对照品溶液，用前配制。
测定法 精密量取供试品0.3ml置试管内，依次加6%乙酸钠溶液1.3ml、1%对氨基苯磺酸溶液0.2ml及1.3%碘液0.1ml，混匀，放置10分钟，加0.4mol/L硫代硫酸钠溶液50μl，混匀脱色，加0.6%a-萘胺溶液40μl，混匀，室温放置60分钟，经每分钟10000转离心5分钟后，取上清液，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在波长520nm处测定吸光度。精密量取不同浓度的对照品溶液各0.3ml，置试管中，自本段前述“依次加6%乙酸钠溶液1.3ml”起，同法操作。精密量取水0.3ml置试管中，自本段前述“依次加6%乙酸钠溶液1.3ml”起，同法操作，作为空白对照。以对照品溶液的羟胺浓度对相应吸光度作直线回归，求得直线回归方程；将测得的供试品的吸光度代入直线回归方程，即得供试品的残留羟胺浓度(nmol/ml)，再根据供试品的蛋白质含量计算出羟胺残留量(nmol/mg蛋白质)。