罗辅医药科技上海有限公司
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  • 卵泡刺激素生物测定法
    卵泡刺激素生物测定法
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    发布时间： 2022 - 11 - 08
    本法系比较尿促性素标准品（S）与供试品（T）对幼大鼠卵巢增重的作用，以测定供试品中卵泡刺激素的效价。　　溶剂的制备    试验当日，称取牛血清白蛋白适量，加0.9%氯化钠溶液溶解，制成每1ml中含1mg的溶液，充分溶解后，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.2±0.2。　　精密称取已知效价的绒促性素（原料或粉针剂均可），加入上述溶液中溶解，制成每1ml中含20单位的溶液，混匀备用。　　标准品溶液的制备    试验当日，按尿促性素标准品中卵泡刺激素的标示效价，用上述溶剂，按高、中、低剂量组（dS3、dS2、dS1）配成3种浓度的标准品溶液，相邻两浓度之比值（r）应相等，且不得大于1∶0.5。一般高浓度的标准品溶液可制成每1ml中含2～5单位。调节剂量使低剂量组卵巢明显增重，高剂量组卵巢增重不致达到极限。标准品溶液置2～10℃贮存，可供3日使用。　　供试品溶液的制备    按供试品中卵泡刺激素的标示量或估计效价（AT），照标准品溶液的制备法制成高、中、低（dT3、dT2、dT1）3种浓度的供试品溶液，相邻两浓度之比值（r）应与标准品相等，供试品与标准品各剂量组所致反应平均值应相近。　　测定法    取健康合格，出生19～23日，或体重36～60g，同一来源的雌性幼大鼠，一次试验所用大鼠的出生日期相差不得超过3日，或体重相差不得超过15g；按体重随机等分成6组，每组不少于8只，每日于大致相同的时间分别给每鼠皮下注入一种浓度的标准品溶液或供试品溶液0.5ml，每日一次，连续注入3次，于最后一次注入24小时后，将动物处死，称重，解剖，摘出卵巢，，剥离附着的组织，去除输卵管，用滤纸吸去周围的液体，直接称重（天平精密度0.1mg）并换算成每10g体重的卵巢重，照生物检定统计法（通则1431）中...
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  • 毛细管电泳法
    毛细管电泳法
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    发布时间： 2022 - 11 - 08
    毛细管电泳法是指以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，根据供试品中各组分淌度（单位电场强度下的迁移速度）和（或）分配行为的差异而实现分离的一种分析方法。　　当熔融石英毛细管内充满操作缓冲液时，管内壁上硅羟基解离释放氢离子至溶液中使管壁带负电荷并与溶液形成双电层（ζ 电位），即使在较低 pH 值缓冲液中情况也如此。当毛细管两端加上直流电压时将使带正电的溶液整体地移向阴极端。此种在电场作用下溶液的整体移动称为电渗流（EOF）。内壁硅羟基的解离度与操作缓冲液 pH 值和添加的改性剂有关。降低溶液 pH 值会降低解离度，减小电渗流；提高溶液 pH 值会提高解离度，增加电渗流。有机添加剂的加入有时会抑制内壁硅羟基的解离，减小电渗流。在操作缓冲液中带电粒子在电场作用下以不同速度向极性相反的方向移动，形成电泳，运动速度等于其电泳速度和电渗速度的矢量和。通常电渗速度大于电泳速度，因此电泳时各组分即使是阴离子也会从毛细管阳极端流向阴极端。为了减小或消除电渗流，除了降低操作缓冲液 pH 值或改变添加剂的种类之外，还可以采用内壁聚合物涂层的毛细管。这种涂层毛细管可减少大分子在管壁上的吸附。
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  • 免疫印迹法
    免疫印迹法
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    发布时间： 2022 - 11 - 08
    本法系以供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶标抗体特异性结合，通过酶学反应的显色，对供试品的抗原特异性进行检查。　　试剂  （1）TG缓冲液   称取三羟甲基氨基甲烷15.12g与甘氨酸72g，加水溶解并稀释至500ml。4℃保存。　　（2）EBM缓冲液  量取TG缓冲液20ml、甲醇40ml，加水稀释至200ml。4℃保存。　　（3）TTBS缓冲液   称取三羟甲基氨基甲烷6.05g与氯化钠4.5g，量取聚山梨酯80 0.55ml，加适量水溶解，用盐酸调pH值至7.5，加水稀释至500ml。4℃保存。　　（4）底物缓冲液  称取3，3'-二氨基联苯胺盐酸盐15mg，加甲醇5ml与30%过氧化氢15μl，加TTBS缓冲液25ml使溶解，即得。临用现配。　　检查法   照SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（通则0541第五法），供试品与阳性对照品上样量应大于100ng。取出凝胶，切去凝胶边缘，浸于EBM缓冲液中30分钟。另取与凝胶同样大小的厚滤纸6张、硝酸纤维素膜1张，用EBM缓冲液浸透。用半干胶转移仪进行转移：在电极板上依次放上湿滤纸3张、硝酸纤维素膜1张、电泳凝胶、湿滤纸3张，盖上电极板，按0.8mA/cm2硝酸纤维素膜恒电流转移45分钟。　　取出硝酸纤维素膜浸入封闭液（10%新生牛血清的TTBS缓冲液，或其他适宜封闭液）封闭60分钟。弃去液体，加入TTBS缓冲液10ml，摇动加入适量的供试品抗体（参考抗体使用说明书的稀释度稀释），室温过夜。硝酸纤维素膜用TTBS缓冲液淋洗1次，再用TTBS缓冲液浸洗3次，每次8分钟。弃去液体，再加入TTBS缓冲液10ml，摇动加入适量的生物素标记的第二抗体，室温放置40分钟。硝酸纤维素膜用TTBS缓冲液淋洗1次，再用TTBS缓冲液浸洗3次，每次8...
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  • 免疫斑点法
    免疫斑点法
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    发布时间： 2022 - 11 - 08
    本法系以供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶标抗体特异性结合，通过酶学反应的显色，对供试品的抗原特异性进行检查。　　试剂  （1）TG缓冲液  精密称取三羟甲基氨基甲烷15.12g与甘氨酸72g，加水溶解并稀释至500ml。4℃保存。　　（2）EBM缓冲液  量取TG缓冲液20ml、甲醇40ml，加水稀释至200ml。4℃保存。　　（3）TTBS缓冲液  称取三羟甲基氨基甲烷6.05g、氯化钠4.5g，吸取聚山梨酯80 0.55ml，加适量水溶解，用盐酸调pH值至7.5，加水稀释至500ml。4℃保存。　　（4）底物缓冲液  称取3，3'-二氨基联苯胺盐酸盐（DAB）15mg，取甲醇5ml、30%过氧化氢15μl，溶于25mlTTBS缓冲液中。用前配制。　　检查法      取硝酸纤维素膜，用EBM缓冲液浸泡15分钟，将供试品、阴性对照品（可用等量的人白蛋白）及阳性对照品点在膜上，上样量应大于10ng。室温干燥60分钟。取出硝酸纤维素膜，浸入封闭液（10%新生牛血清的TTBS缓冲液，或其他适宜的封闭液）封闭60分钟。弃去液体，加入TTBS缓冲液10ml，摇动加入适量的供试品抗体（参考抗体使用说明书的稀释度稀释），室温过夜。硝酸纤维素膜用TTBS缓冲液淋洗1次，再用TTBS缓冲液浸洗3次，每次8分钟。弃去液体，更换TTBS缓冲液10ml，摇动加入适量的生物素标记的第二抗体，室温放置40分钟。硝酸纤维素膜用TTBS缓冲液淋洗1次，再用TTBS缓冲液浸洗3次，每次8分钟。弃去液体，更换TTBS缓冲液10ml，摇动加入适量的亲和素溶液和生物素标记的辣根过氧化物酶溶液，室温放置60分钟。硝酸纤维素膜用TTBS缓冲液淋洗1次，再用TTBS缓冲液浸洗4次，每次8分钟。弃去液体，加入适量底物缓冲液置于室...
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  • 免疫电泳法
    免疫电泳法
    价格： ￥ 0 RMB
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    发布时间： 2022 - 11 - 08
    本法系将供试品通过电泳分离成区带的各抗原，然后与相应的抗体进行双相免疫扩散，当两者比例合适时形成可见的沉淀弧。将沉淀弧与已知标准抗原、抗体生成的沉淀弧的位置和形状进行比较，即可分析供试品中的成分及其性质。　　试剂   （1）巴比妥缓冲液（pH8.6）   称取巴比妥4.14g与巴比妥钠23.18g，加适量水，加热使溶解，冷却至室温，再加叠氮钠0.15g，加水使溶解成1500ml。　　（2）0.5%氨基黑染色剂   称取氨基黑10B  0.5g，加甲醇50ml、冰醋酸10ml与水40ml的混合液，溶解。　　（3）1.5%琼脂糖溶液     称取琼脂糖1.5g，加水50ml与巴比妥缓冲液50ml，加热使溶胀完全。　　（4）脱色液     量取乙醇45ml、冰醋酸5ml与水50ml，混合均匀。　　（5）溴酚蓝指示液      称取溴酚蓝50mg，加水使溶解成100ml。　　对照品     正常人血清或其他适宜的对照品。　　供试品溶液的制备     用0.85%～0.90%氯化钠溶液将供试品蛋白质浓度稀释成0.5%。　　检查法      将1.5%琼脂糖溶液倾倒于大小适宜的水平玻板上，厚度约3mm，静置，待凝胶凝固成无气泡的均匀薄层后，于琼脂糖凝胶板负极1/3处的上下各打1孔，孔径3mm，孔距10～15mm。测定孔加供试品溶液10μl和溴酚蓝指示液1滴，对照孔加正常人血清或人血浆10μl和溴酚蓝指示液1滴。用3层滤纸搭桥和巴比妥缓冲液（电泳缓冲液）接触，100V恒压电泳约2小时（指示剂迁移到前沿）。电泳结束后，在两孔之间距离两端3-5m...
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  • 膜剂
    膜剂
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    发布时间： 2022 - 11 - 08
    膜剂系指原料药物与适宜的成膜材料经加工制成的膜状制剂。供口服或黏膜用。　　膜剂在生产与贮藏期间应符合下列规定。　　一、原辅料的选择应考虑到可能引起的毒性和局部刺激性。常用的成膜材料有聚乙烯醇、丙烯酸树脂类、纤维素类及其他天然高分子材料。　　二、膜剂常用涂布法、流延法、胶注法等方法制备。原料药物如为水溶性，应与成膜材料制成具有一定黏度的溶液；如为不溶性原料药物，应粉碎成极细粉，并与成膜材料等混合均匀。　　三、膜剂外观应完整光洁、厚度一致、色泽均匀、无明显气泡。多剂量的膜剂，分格压痕应均匀清晰，并能按压痕撕开。　　四、膜剂所用的包装材料应无毒性、能够防止污染、方便使用，并不能与原料药物或成膜材料发生理化作用。　　五、除另有规定外，膜剂应密封贮存，防止受潮、发霉和变质。　　除另有规定外，膜剂应进行以下相应检查。
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